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一般描述:
尿嘧啶-DNA 糖基化酶 (UDG) 通过切割尿嘧啶碱基和糖骨架之间的 N-糖苷键,从含 dU 的 DNA 中切除尿嘧啶。这种裂解产生碱敏感的嘧啶位点被DNA聚合酶阻断复制或阻止成为杂交位点。 只有含双链和单链dU的DNA均可被尿嘧啶-DNA糖基化酶识别并降解,而RNA和正常含dT的DNA则完全不会。 来自冷水鱼的尿嘧啶-DNA糖基化酶具有热不稳定。在50°C孵育10分钟后即可发生完全不可逆灭活。
活性单位的定义
● 在 25℃,30 min 内降解1 μg 含有尿嘧啶的 dsDNA 所需要的酶 量定义为 1 个活性单位(U)。
应用:
● DNA修复和突变检测。
● 提高PCR产物的克隆效率。
● 提高定点诱变的效率。
● 蛋白质-DNA相互作用的研究。
● 消除 PCR,qPCR与 RT-qPCR扩增过程中的气溶胶污染
特点和优势
● 防止PCR残留污染。
● 提高位点定向突变生成过程的效率。
● 标记寡核苷酸探针。
● 因具有更低的热稳定性而比相应来自大肠杆菌的酶可实现更快的失活。
● 在+2至+8°C孵育至少数小时内不会降解dU-PCR产物。


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